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液相色譜柱選擇的方法和條件
點(diǎn)擊次數(shù)：1686 發(fā)布時(shí)間：2020-08-12
液相色譜柱選擇的方法和條件
①填料基質(zhì)
a.硅膠基質(zhì)：純度本錢低，度大，化學(xué)修飾輕易，但pH值范圍有限。大多硅膠基質(zhì)填料在pH2-8之間穩(wěn)定，但經(jīng)過(guò)修飾的硅膠鍵合相可以穩(wěn)定在pH1.5-10。
b.聚合物基質(zhì)：應(yīng)用pH值范圍寬，溫度穩(wěn)定(溫可以達(dá)到80度以上)，機(jī)械度小。
②顆粒外形
大多現(xiàn)代HPLC填料都是球形顆粒，但有時(shí)是不規(guī)則的顆粒。球形顆粒提供較低的柱壓、較的柱效和穩(wěn)定性以及較長(zhǎng)的柱壽命在使用粘度的活動(dòng)相時(shí);不規(guī)則顆粒有較大比表面積和相對(duì)低廉的價(jià)格。
③顆粒粒徑
粒徑越小柱效越、分離度越，但同時(shí)會(huì)導(dǎo)致較柱壓降。選擇1.5-3μm的填料以解決一些復(fù)雜樣品,UPLC可以使用1.5μm的填料;另外10μm或更大粒徑的填料用作半制備或制備柱。
④含碳量
含碳量指的是硅膠表面鍵合相的比例，與比表面積和鍵合覆蓋度等有關(guān)。含碳量進(jìn)步柱容量、分辨率及分析時(shí)間，用于要求分離度的復(fù)雜樣品;低含碳量分析時(shí)間短、展現(xiàn)不同的選擇性，用于快速分析簡(jiǎn)單樣品及需要含水活動(dòng)相條件的樣品。一般C18的含碳量在7-19%不等。
⑤孔徑和比表面積
HPLC吸附介質(zhì)是多孔的顆粒，盡大多數(shù)的反應(yīng)表面于孔內(nèi)。因此，分子必須進(jìn)進(jìn)孔內(nèi)才能被吸附和分離。
孔徑和比表面積是相輔相成的兩個(gè)概念。孔徑小比表面積大，反之亦然。比表面積大，增加樣品與鍵合相之間的反應(yīng)，增加保存,上樣量和復(fù)雜成分的分離度;比表面積小，平衡時(shí)間快，適合梯度分析。
⑥孔容和機(jī)械度
孔容，又稱“孔體積”。指單位顆粒的空隙體積大小。它能好的反應(yīng)填料的機(jī)械度。孔體積大的填料相對(duì)孔體積小的填料機(jī)械度要略弱。孔體積為1.5mL/g或更小的填料大多用于HPLC分離，而孔體積大于1.5mL/g的填料使用于尺寸排阻色譜和低壓色譜。
⑦封端封端
封端能夠降低性堿性化合物由于與裸露的硅醇基相互作用而產(chǎn)生的拖尾峰。不封端鍵合相相對(duì)封端鍵合相會(huì)產(chǎn)生不同的選擇性，尤其是性樣品。
